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你的細胞快樂嗎?

更新時間:2016-05-30      點擊次數(shù):2015

科研同學養(yǎng)細胞,

都把細胞當成自己的娃,

娃生活地怎么樣,心情好不好,

快不快樂,是每天都要關注的事情。

因為擔心一不留神,

細胞娃就生存地不好,

甚至于受到污染,細胞over了!

如何讓細胞快樂,我們一起往下看!

1.確保所有實驗室材料都無菌

交叉污染是細胞培養(yǎng)的大敵。即使是zui輕微的污染,也可能毀了幾個星期的成果。因培養(yǎng)箱內(nèi)溫暖潮濕,真菌極易生長,因此必須注意定期清潔。此外,在將培養(yǎng)瓶、移液管及其他的相關物品放入超凈臺之前,應用酒精擦拭干凈,以避免污染。

2.小心處理您的培養(yǎng)物

細胞培養(yǎng)的脆弱性怎么強調(diào)也不為過。劇烈搖晃,或連續(xù)的溫度波動可能會對生長產(chǎn)生不利的影響。確保培養(yǎng)箱是水平的,溫度均一,且遠離電動儀器。此外,盡量避免一次處理多個細胞系,因為它可能會影響細胞的基因型和表型。您還應定期完成STR圖譜分析,以確認細胞系的身份。

3.在使用前正確解凍細胞

盡管解凍看起來是個簡單的步驟,但必須操作得當,以免傷害細胞。長時間暴露在高溫條件下會使細胞無法鋪板。因此,凍存管應當在37°C水浴中放置2分鐘,然后用條件培養(yǎng)基稀釋,以避免DMSO造成直接傷害。

4.使用對數(shù)生長期的細胞

細胞培養(yǎng)過程共有3個階段:停滯期、對數(shù)期和平臺期,分別代表了低細胞生長、高細胞生長和無細胞生長。zui有活力的細胞是健康的,快速分lie的,在對數(shù)期以70-80%的匯合度存在。

5.在傳代之前不要讓細胞*匯合

匯合度是指貼壁細胞占據(jù)培養(yǎng)瓶表面積的比例。*匯合意味著100%的表面都被貼壁細胞覆蓋。一定要避免這種狀態(tài),因為它意味著細胞不能繼續(xù)生長。不過,當務之急是使用活躍生長的細胞。

6.選擇*的培養(yǎng)基開發(fā)策略

在細胞培養(yǎng)過程中,培養(yǎng)基是控制產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量和成本的zui重要因素。必須針對每種培養(yǎng)物來定制培養(yǎng)基,以優(yōu)化實驗結果。在決定以哪種方式來開發(fā)您的培養(yǎng)基時,您有幾個選擇。您可以購買現(xiàn)成的,自己開發(fā),也可以與另一家公司合作開發(fā)特定的培養(yǎng)基。在這個過程中,您需要考慮時間和成本等因素。

7.配制干粉培養(yǎng)基時評估水的質(zhì)量

液體培養(yǎng)基往往會帶來比干粉培養(yǎng)基更高質(zhì)量的結果。這可能與水的質(zhì)量有關。由于細菌在水中迅速生長,故需要監(jiān)控內(nèi)毒素及其他污染物。商業(yè)公司有資源來監(jiān)控和控制細菌生長,比如過濾器。因此使用商業(yè)化生產(chǎn)的液體培養(yǎng)基會更加可靠一點。

8.利用細胞的代謝特性來優(yōu)化培養(yǎng)基

分析使用過的培養(yǎng)基,有助于鑒定必要成分的代謝速率,包括氨基酸和維生素。從細胞生長階段和蛋白生產(chǎn)階段收集到的動態(tài)代謝圖譜可用來平衡基礎培養(yǎng)基和添加培養(yǎng)基,指導培養(yǎng)基的重點,有助于蛋白質(zhì)的生產(chǎn)。

9.避免細胞的過度消化

胰蛋白酶通過消化負責讓細胞與容器結合的蛋白質(zhì),而實現(xiàn)貼壁細胞的傳代。如果細胞暴露在胰酶中時間太長,則胰酶將開始切割細胞表面蛋白,這會影響細胞行駛正常功能的能力。

10.培養(yǎng)基中不要一直使用抗生素

隨著細胞培養(yǎng)物更加頻繁地暴露在抗生素中,對抗生素有著天然耐藥性的菌株將開始出現(xiàn)。這種現(xiàn)象可掩蓋潛在的污染。

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