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關于厭氧菌的甘油保藏方法

更新時間:2016-11-15      點擊次數(shù):7199

厭氧菌的甘油保藏方法: 

1、 厭氧甘油的制備: 厭氧瓶或厭氧管中放置一定量的甘油,甘油的量根據(jù)需要加入,不要多加,因為厭氧甘油制備好以后不能反復滅菌,反復滅菌甘油會變性而呈黃色,且有一股芳香味道。加入終濃度為0.04 %的 L-cysteine和 1 %的5 %的 N2S母液。往厭氧瓶中通N2,通氣時間和配制培養(yǎng)基時時間相同。蓋上塞子和蓋子。121 ℃, 20 min 滅菌后備用。 

2、 取新鮮菌液(對數(shù)期),在通N2 的情況下,用針筒和針頭往有菌液的厭氧管中加入終濃度為15-20 %的厭氧甘油,再通一會N2,目的是趕走在轉移甘油過程中帶進去的O2。蓋上塞子和蓋子,混勻,凍于-80 ℃。 

3、 活化:用針頭和針頭吸取一定甘油保藏的菌液,加到培養(yǎng)基當中,加的量一般要多于1 %,因為厭氧菌的生物量比較小,一般2到5 %左右。目測加完甘油菌液的培養(yǎng)基是否渾濁,并作記錄。如果加入的菌液太多,造成一開始培養(yǎng)基就比較渾濁,會干擾我們對菌是否生長的判斷,而且甘油太多也會抑制菌的生長。 

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